简介
如果存有甘油菌或穿刺菌，并且需要从中纯化质粒DNA，就需要从这个菌液中分离出一个单独的单克隆菌落。使用新鲜的含有抗生素的固体培养基分离单个菌落，并挑取接种至液体培养基，最终进行DNA纯化，这可以将使纯化DNA中混合质粒的可能性降至最低。下文将阐释如何通过在LB固体培养基上划线来分离单个菌落。
实验器材
无菌枪头或接种环
酒精灯
细菌培养箱
实验试剂
LB固体培养基（含适当抗生素）
储存的菌液
实验步骤
1.准备含适当抗生素的LB固体培养基。
在平板底部标记质粒名称、日期等信息。实验室环境中的标签对组织很重要，建议您为所有的实验平板保留标准标签系统。
2.用70%乙醇喷洒实验台，然后用纸巾擦拭，对环境进行消毒。在酒精灯附近工作，保持无菌环境。
3.选择合适的甘油菌或穿刺菌菌种。
提示：如果利用接种环进行操作，可以通过火焰对其进行消毒，但需要确保在接触细菌之前，接种环有足够的时间冷却。
4.如图所示，将细菌轻轻地涂在平板的一侧，形成条纹1。
注意：以一定角度握住无菌枪头，就像拿铅笔一样，这样可以形成较宽“笔划”。只接触平板表面，不要挖琼脂。
提示：另一种非常棒的技巧是画不连续的线。首先沿着平板的一侧边缘划出垂直的细菌线。然后在板的另一部分划出水平线，然后在板的另一部分再划线。确保每个新部分的划线至少与前一部分的一行交叉，以便其中包含一些细菌。
5.在37°C条件下，将平板上培养过夜（12-18小时）。
注意：某些质粒或细菌需要在30°C而不是37°C下生长。这通常适用于较大的不稳定质粒，有时会在37°C下重组。所以请在培养平板前进行查询。
6.次日，一般可以看到单个菌落。单个菌落看起来像固体培养基上生长的白点。这个点由数百万个基因相同的细菌组成，这些细菌来自同一个细菌。如果细菌生长过于密集，并且没有看到单个菌落，则需要稀释菌液重新在新的平板上划线以获得单个菌落。
7.一旦获得了单个菌落，就可以继续提取质粒DNA或将单个菌落用于其他实验。
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